Sistemas no virales de transferencia de genes en células madre mesenquimales

Abstract

La prevalencia de la osteoartritis (OA), así como las dificultades actuales derivadas de su tratamiento han abierto paso a nuevos enfoques terapéuticos prometedores como es la terapia génica de las células madre mesenquimales (MSCs). Sin embargo, estas poblaciones celulares resultan difíciles de transfectar y los métodos virales estudiados han demostrado ser poco seguros pese a proporcionar altas eficiencias de transferencia génica. Por todo ello, las expectativas actuales se centran en la utilización de vectores químicos no virales que superen las limitaciones de seguridad de los anteriores, y generen además elevadas eficiencias de transfección. Por ello, el presente estudio se centra en la utilización de líneas inmortalizadas de MSCs (iMSCs) generadas a partir de muestras de medula ósea de pacientes con el fin de determinar las condiciones y los reactivos más eficaces para su transferencia génica. Las iMSCs fueron inicialmente caracterizadas con el fin de verificar su capacidad de diferenciación al linaje mesodérmico. Posteriormente, se evaluaron las condiciones óptimas de transfección de dos líneas de iMSCs mediante la complejación de un plásmido de ADN reportero con tres reactivos comerciales (Lipofectamina, TransIT o JetOptimus). Tras definir las condiciones óptimas de cada reactivo se evaluó su eficiencia de transfección a lo largo del tiempo. Los resultados obtenidos mostraron que las iMSCs mantienen un mayor potencial de diferenciación osteogénico y condrogénico en comparación con el adipogénico, lo cual podría tener interés terapéutico en el tratamiento de la OA. Además, se determinó que el reactivo más eficiente para transfectar las iMSCs es la Lipofectamina, a una dosis de 0.2 μL, y a una densidad celular de 7,500 células por pocillo, aunque la toxicidad de este compuesto limita la supervivencia celular a partir de las 24 horas de contacto con el mismo.