Evaluación de nuevos adyuvantes en la vacunación frente a la paratuberculosis = Evaluation of new adjuvants in the vaccination against ovine paratuberculosis

Abstract

En la presente tesis doctoral se evalúa la actividad adyuvante del Montanide® ISA 266 y Montanide® IMS 1312 junto a bacilos inactivados de Mycobacterium avium subsp. Paratuberculosis (Map), estudiando la reacción local inducida en el punto de inoculación y la respuesta inmune periférica, comparándolos con el adyuvante empleado en la vacuna comercial Gudair® (aceite mineral en doble emulsión estable). Se desarrollan tres experiencias en las que se vacunan corderos de 30 días de edad, evaluando cada vez la respuesta inmune humoral y celular asociadas a la vacunación, la evolución clínica y las características anatomopatológicas de la reacción local producidas por los diferentes preparados vacunales, y en el último de ellos, la eficacia del producto con mejores resultados en las experiencias anteriores, frente a una infección experimental con Map. En el primer experimento se emplearon 40 corderos de 1 mes de edad, divididos en cuatro grupos de 10 individuos cada uno. Los grupos A, B y C fueron vacunados con la vacuna comercial Gudair®, una vacuna elaborada con el adyuvante Montanide® ISA 266 (50% de aceite mineral, 50% de un aceite metabolizable y un surfactante) y otra con Montanide® IMS 1312 (compuesto exclusivamente por elementos orgánicos), respectivamente. Todos ellos con el mismo número de bacilos y cepa de Map. El cuarto grupo quedó como control. Se estudió la respuesta inmune humoral mediante un test de ELISA y la prueba de inmunodifusión en gel de agar para la detección de anticuerpos específicos frente a Map, y la respuesta mediada por células mediante el test del interferón-γ y la intradermorreacción empleando PPD aviar y PPD bovina. También se estudiaron las características anatomopatológicas del nódulo vacunal y del nódulo linfático preescapular en sacrificios a los 15, 30 y 75 días post-vacunación y se determinó el porcentaje de linfocitos CD4+, CD8+, TCR-γδ, CD45R y B, en sangre y en los nódulos linfáticos preescapular y mesentérico yeyunal caudal mediante citometría de flujo. En el grupo B, vacunado con Montanide® ISA 266, la respuesta inmune celular fue más intensa, coincidiendo con una mejor conformación de los nódulos vacunales, siendo estos de tamaño medio, redondeados, móviles, fibrosos y con una distribución más homogénea del antígeno. En el grupo A los nódulos eran más grandes, irregulares, infiltrantes y con un gran centro necrótico que en algunos casos fistulizó al exterior. La respuesta humoral en este caso fue superior a la observada en el resto de los grupos. No se apreciaron variaciones significativas en las poblaciones de linfocitos sanguíneos, mientras que si fue evidente el incremento de células CD45R y B en el ganglio preescapular de animales vacunados, especialmente de los grupos A y B