Construcción genética quimérica recombinante de la región extracelular del ligando PD-1 homólogo (vista) para la identificación de su receptor

Abstract

El supresor de la activación de células T con dominio variable de inmunoglobulina (VISTA) es un miembro recientemente descrito de la familia de ligandos inmunorreguladores B7 que se expresa preferentemente en la superficie de linfocitos T y células presentadoras de antígenos (APCs). Es una glicoproteína coinhibidora capaz de atenuar la respuesta inmune mediada por linfocitos T activados cuando interacciona con un receptor que se desconoce. Esta actividad convierte a VISTA en una diana terapéutica potencial en el tratamiento de enfermedades autoinmunes, el rechazo de los trasplantes y el desarrollo de inmunoterapias frente al cáncer. En este trabajo, se han diseñado dos proteínas de fusión recombinantes constituidas por la región extracelular de VISTA y dos tags destinados a permitir su detección, un epítopo y el péptido aceptor de biotina AviTag. Para cumplir este objetivo, se expresó de forma transitoria cada construcción quimérica junto a un vector que codifica para la biotina ligasa de E. coli (BirA) en células HEK-293T mediante cotransfección celular. Se confirmó la expresión de ambas proteínas recombinantes biotiniladas mediante detección directa con estreptavidina-HRPO. El desarrollo de estas herramientas moleculares permitirá realizar futuros ensayos para aislar, purificar y finalmente identificar el receptor de VISTA