Preparation of inocula for experimental infection of blood with Streptococcus pneumoniae

Abstract

Las infecciones experimentales de cualquiera de las células requieren la preparación de buena calidad inóculos. Desafortunadamente, el patógeno pulmonar Streptococcus pneumoniae es un microorganismo que sufre un proceso de autolisis cuando se cultiva in vitro. La suplementación de caldo de Todd-Hewitt con un tampón biológico (20 mM Tris-HCl, pH = 7.8) promueve un retraso de seis horas en el comienzo del proceso de autólisis. Hay mejoras cuando hay lavado de bacterias antes de la congelación, evitando manipulaciones después dedescongelación, y el uso de glicerol (<18%) como un crioprotector, en lugar de reactivos como leche desnatada que puede afectar a los cultivos celulares. Con la propuesta de protocolo de > 70% de la bacterias congeladas era viable después de 28 semanas a -80 ° C, y las alícuotas fueron altamente homogéneo. Hemos probado su utilidad en un modelo de infección de la sangre entera y tienen encontró que el plasma humano exhibe una actividad microbicida superior a la sangre entera, una resultado de que no hemos encontrado informado anteriormente