RT info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
T1 Modelos de infección "in vitro" para el análisis de la respuesta inmunológica frente a micobacterias
T2 In vitro infections models for the analysis of inmunological response against mycobacteria
A1 Blanco Conde, Sara Luisa
A2 Medicina Preventiva
K1 Medicina. Salud
K1 Bioquímica inmunológica
K1 Microbiología clínica
K1 Cultivo celular
K1 Enfermedades infecciosas
K1 2412 Inmunología
AB [ES] M. tuberculosis es la especie del género Mycobacterium sp que más infecciones causa en todo el mundo. Sin embargo, en las últimas décadas ha aumentado considerablemente la prevalencia de infecciones por micobacterias no tuberculosas (MNT), fundamentalmente la forma pulmonar asociada a patologías crónicas, como bronquiectasias. Todavía se desconocen todos los mecanismos inmunológicos implicados en estas infecciones, en parte por la diversidad de ensayos in vitro disponibles, que no logran reproducir adecuadamente la respuesta fisiológica. En el presente trabajo, optimizamos diversos modelos derivados de células sanguíneas para analizar la actividad anti-micobacteriana frente a diferentes especies del género, seleccionadas en función de su nivel de patogenicidad, para reproducir los fenómenos sucedidos in vivo en poblaciones susceptibles, como fumadores o pacientes con bronquiectasias.La purificación celular se realizó, generalmente, por doble gradiente de sedimentación y la individualización bacteriana, por sonicación. En la infección in vitro se empleó un bajo número de bacterias por célula, que se incubaron en medio sin suero. Para poder asegurar que los aislados clínicos correspondían a cepas diferentes, diseñamos un método sencillo de genotipado, basado en la técnica “Amplified Fragment Length Polymorphism” (AFLP, en inglés), que nos permitió obtener resultados fácilmente interpretables, con buen nivel de discriminación.En el modelo de macrófagos derivados de monocitos no se observó actividad micobactericida. Sin embargo, con los modelos de leucocitos totales y sangre completa, que comprenden todas las fracciones celulares inmunitarias y el componente humoral, obtuvimos diferentes patrones de resistencia en función de la patogenicidad de las cepas infectantes. En estos modelos se comprobó la restricción de crecimiento en todas las especies empleando EDTA como anticoagulante, relacionada con su actividad bacteriostática. También se emplearon para valorar la respuesta inmunitaria de la población fumadora frente a M. tuberculosis, sin observar diferencias con el grupo control (no fumadores), en los distintos modelos celulares empleados (neutrófilos, células mononucleares de sangre periférica o monocitos).Para reproducir aspectos de la respuesta inmunológica en las bronquiectasias empleamos un modelo de neutrófilos con diferentes cepas de M. abscessus y de M. mageritense procedentes de aislados clínicos. No observamos actividad micobactericida contra ninguna especie, pero sí una limitación del crecimiento y agregación de M. abscessus al emplear altas concentraciones celulares, que se potenciaba al añadir, en el tiempo, neutrófilos frescos, antes de que se iniciara la multiplicación bacteriana. Si la agregación llegaba a producirse, comprobamos que se incrementaba la liberación de enzimas proteolíticas, relacionadas con el daño tisular en esta patología. Si bien los sobrenadantes de células infectadas con M. mageritense aumentaron la quimiotaxis de los neutrófilos, este efecto no se observó empleando M. abscessus.
LK http://hdl.handle.net/10612/16243
UL http://hdl.handle.net/10612/16243
NO Blanco  Conde, S. L. (2023). Modelos de infección "in vitro" para el análisis de la respuesta inmunológica frente a micobacterias. [Tesis doctoral, Universidad de León]
NO 203 p.
DS BULERIA. Repositorio Institucional de la Universidad de León
RD 19-abr-2024