Mecanismo de acción de derivados indenoisoquinolínicos frente a la DNA Topoisomerasa IB de Leishmania como diana terapéutica = Mechanism of action from indenoisoquinolinic derivatives on Leishmania DNA topoisomerase IB as therapeutic target

Abstract

Como continuación de trabajos anteriores en nuestro laboratorio, en la primera parte de esta Memoria hemos establecido una plataforma de cribado ex vivo en explantes de bazo de ratones BALB/c infectados por una cepa de Leishmania infantum (responsable de leishmaniasis visceral en el área Mediterránea) modificada genéticamente para que emita fluorescencia infrarroja en todas las etapas de su ciclo vital, con el que hemos cribado varias colecciones de moléculas pequeñas ¿ 298 en total. Este método reduce el número de animales utilizados ya que con un solo bazo infectado se pueden sembrar hasta dieciséis placas de 384 pocillos, permitiendo así la evaluación de varias colecciones de pequeñas moléculas a dosis única.

Complementariamente, la segunda parte de la Memoria, ha consistido en hacer un estudio basado en la DNA-topoisomerasa IB recombinante de Leishmania como diana molecular de intervención terapéutica y sus consecuencias con varias series de compuestos ¿ un total de 37 moléculas pequeñas ¿ de estructura indenoisoquinolínica que habían destacado como potenciales leishmanicidas en los ensayos anteriores. Se estudió la capacidad de inhibición de la enzima del patógeno, comparada con la humana y la tendencia a formar complejos con el DNA. Finalmente, se demostró que estos compuestos producían roturas de doble cadena de DNA que eran detectados por la fosforilación de la histona H2A y daban lugar a cambios en el ciclo celular del patógeno.